Моделирование болезни Альцгеймера на животных


https://doi.org/2618-6667-2018-77-97-108

Полный текст:


Аннотация

Болезнь Альцгеймера (БА) — распространенное нейродегенеративное заболевание, которое характеризуется нарушениями памяти и прогрессирующим неизлечимым снижением когнитивных функций. Моделирование БА на животных позволяет изучать патогенез заболевания, проводить доклинические испытания лекарственных препаратов, искать возможные способы приостановить развитие и прогрессирование заболевания. Так как этиология БА остается неизвестной, то не существует «естественной» биологической модели, позволяющей полностью отразить совокупность патологических нарушений, возникающих у человека с данной патологией, а среди разнообразия вариантов патогенетических моделей нет общепринятой. В настоящем обзоре приведен анализ данных литературы о современных подходах к моделированию БА на животных. Разобраны важные аспекты заболевания, которые необходимо учитывать при моделировании (нарушения метаболизма β-амилоида и тау-белка, роль воспалительных реакций и др.). Рассмотрены такие распространенные модели, как использование трансгенных животных первого и второго поколений, экспрессирующих человеческие гены с мутациями, обнаруженными при семейной форме заболевания; модели естественного и ускоренного старения; инъекционные модели, заключающиеся во внутрижелудочковом введении нейротоксинов. Обсуждены и более редкие хирургические модели, фенотипически имитирующие картину БА. Анализируется важная роль воспалительных реакций в патогенезе заболевания, обусловливающая интерес к моделям нейровоспаления, манифестирующего до развития других патологических нарушений, характерных для БА. Оценены преимущества и недостатки каждой модели, особенности их применения, основные результаты, полученные с их помощью, перспективные направления для дальнейших исследований.


Об авторах

Анна Андреевна Шмакова
ФГБНУ «Научный центр психического здоровья», Москва
Россия
лаборант-исследователь, лаборатория нейроиммунологии


Любовь Васильевна Андросова
ФГБНУ «Научный центр психического здоровья», Москва
Россия

кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник, лаборатория
нейроиммунологии



Список литературы

1. Gulyaeva N.V;, Bobkova N.V., Kolosova N.G., Samokhin A.N., Stepanichev M.Y., Stefanova N.A. Molecular and cellular mechanisms of sporadic Alzheimer’s disease: Studies on Rodent Models in vivo. Biochemistry (Mosc). 2017;82(10):1088–1102. doi: 10.1371/journal. pone.0080706

2. Scheltens P., Blennow K., Breteler M.M., de Strooper B., Frisoni G.B., Salloway S., Van der Flier W.M. Alzheimer’s disease. Lancet. 2016;388(10043):505–517. doi: 10.1016/S0140-6736(15)01124-1

3. Winblad B., Amouyel P., Andrieu S., Ballard C., Brayne C., Brodaty H., Cedazo-Minguez A., Dubois B., Edvardsson D., Feldman H., Fratiglioni L., Frisoni G.B., Gauthier S., Georges J., Graff C., Iqbal K., Jessen F., Johansson G., Jönsson L., Kivipelto M., Knapp M., Mangi J alasche F., Melis R., Nordberg A., Rikkert M.O., Qiu C., Sakmar Т.P., Scheltens P., Schneider L.S., Sperling R., Tjernberg L.O., Walde- mar G., Wimo A., Zetterberg H. Defeating Alzheimer’s disease and other dementias: a priority for European science and society. Lancet Neurol. 2016;15(5):455–532. doi: 10.1016/S1474-4422(16)00062-4 c

4. Деменция. Информационный бюллетень ВОЗ. Декабрь 2017 г. URL: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs362/ru/. Ссылка активна на 15.01.2018.

5. Hyman B.T., Phelps C.H., Beach T.G., Bigio E.H., Cairns N.J., Carrillo M.C., Dickson D.W., Duyckaerts C., Frosch M.P., Masliah E., r Mirra S.S., Nelson P.T., Schneider J.A., Thal D.R., Thies B., Trojanowski J.Q., Vinters H.V., Montine T.J. National Institute on Agj ing-Alzheimer’s Association guidelines for the neuropathologic asi sessment of Alzheimer’s disease. Alzheimers Dement. 2012;8(1):1–13. s doi: 10.1016/j.jalz.2011.10.007

6. LaFerla F.M., Green K.N. Animal models of Alzheimer disease. Cold Spring Harb Perspect. Med. 2012;2(11). doi: 10.1101/cshperspect. a006320

7. Kumar K., Kumar A., Keegan R.M., Deshmukh R. Recent advances in the neurobiology and neuropharmacology of Alzheimer’s disease. Biomed Pharmacother. 2017;98:297–307. doi: 10.1016/j. biopha.2017.12.053

8. Sasaguri H., Nilsson P., Hashimoto S., Nagata K., Saito T., De Strooper B., Hardy J., Vassar R., Winblad B., Saido T.C. APP mouse models for Alzheimer’s disease preclinical studies. EMBO J. 2017;36(17):2473–2487. doi: 10.15252/embj.201797397

9. Campion D., Dumanchin C., Hannequin D., Dubois B., Belliard S., Puel M., Thomas-Anterion C., Michon A., Martin C., Charbonnier F., Raux G., Camuzat A., Penet C., Mesnage V., Martinez M., Clerget-Darpoux F., Brice A., Frebourg T. Early-onset autosomal dominant Alzheimer disease: prevalence, genetic heterogeneity, and mutation spectrum. Am. J. Hum. Genet. 1999;65(3):664–670. doi: 10.1086/302553

10. Priller C., Bauer T., Mitteregger G., Krebs B., Kretzschmar H.A., Herms J. Synapse formation and function is modulated by the amyloid precursor protein. J. Neurosci. 2006;26(27):7212–7221. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1450-06.2006

11. Turner P.R., O’Connor K., Tate W.P., Abraham W.C. Roles of amyloid precursor protein and its fragments in regulating neural activity, plasticity and memory. Prog. Neurobiol. 2003;70(1):1–32.

12. Benedikz E., Kloskowska E., Winblad B. The rat as an animal model of Alzheimer’s disease. J. Cell Mol. Med. 2009;13(6):1034–1042. doi: 10.1111/j.1582-4934.2009.00781.x

13. Chávez-Gutiérrez L., Bammens L., Benilova I., Vandersteen A., Benurwar M., Borgers M., Lismont S., Zhou L., Van Cleynenbreugel S., Esselmann H., Wiltfang J., Serneels L., Karran E., Gijsen H., Schymkowitz J., Rousseau F., Broersen K., De Strooper B. The mechanism of γ-secretase dysfunction in familial Alzheimer disease. EMBO J. 2012;31(10):2261–2274. doi: 10.1007/s12035-012-8375-5

14. Rosenberg R.N., Lambracht-Washington D., Yu G., Xia W. Genomics of Alzheimer disease: a review. JAMA Neurol. 2016;73(7):867–874. doi: 10.1001/jamaneurol.2016.0301

15. Wisniewski T., Goñi F. Immunotherapeutic approaches for Alzheimer’s disease. Neuron. 2015;85(6):1162–1176. doi: 10.1016/j.neuron.2014.12.064

16. Cavanaugh S.E., Pippin J.J., Barnard N.D. Animal models of Alzheimer disease: historical pitfalls and a path forward. ALTEX. 2014;31(3):279–302. doi: 10.14573/altex.1310071

17. Heppner F.L., Ransohoff R.M., Becher B. Immune attack: the role of inflammation in Alzheimer disease. Nat. Rev. Neurosci. 2015;16(6):358–372. doi: 10.1038/nrn3880

18. Клюшник Т.П., Андросова Л.В., Михайлова Н.М., Соколов А.В., Костевич В.А., Захарова Е.Т., Васильев В.Б. Потенциальные маркеры болезни Альцгеймера, ассоциированные с воспалением. Психиатрия. 2014;1:28–34.

19. Клюшник Т.П., Андросова Л.В., Дупин А.М. Врожденный иммунитет и болезнь Альцгеймера. Психиатрия. 2011;1:52–58.

20. Андросова Л.В., Михайлова Н.М., Зозуля С.А., Дупин А.М., Рассадина Г.А., Лаврентьева Н.В., Клюшник Т.П. Маркеры воспаления при болезни Альцгеймера и сосудистой деменции. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. 2013;113(2):49–53.

21. Nazem A., Sankowski R., Bacher M., Al-Abed Y. Rodent models of neuroinflammation for Alzheimer’s disease. J. Neuroinflammation. 2015;12:74. doi: 10.1186/s12974-015-0291-y

22. Pizza V., Agresta A., D’Acunto C.W., Festa M., Capasso A. Neuroinflamm-aging and neurodegenerative diseases: an overview. CNS Neurol. Disord. Drug Targets. 2011;10(5):621–634.

23. Franceschi C., Capri M., Monti D., Giunta S., Olivieri F., Sevini F., Panourgia M.P., Invidia L., Celani L., Scurti M., Cevenini E., Castellani G.C., Salvioli S. Inflammaging and anti-inflammaging: a sys- temic perspective on aging and longevity emerged from studies in humans. Mech. Ageing Dev. 2007;128(1):92–105. doi: 10.1016/ j.mad.2006.11.016

24. Krstic D., Knuesel I. Deciphering the mechanism underlying late-onset Alzheimer disease. Nat. Rev. Neurol. 2013;9(1):25–34. doi: 10.1038/nrneurol.2012.236

25. Воронина Т.А., Островская Р.У. Методические указания по изучению ноотропной активности фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ под общей редакцией члена-корреспондента РАМН, профессора Р.У. Хабриева. М.: Медицина; 2005:308–320.

26. Stepanichev M.Y., Moiseeva Y.V., Lazareva N.A., Gulyaeva N.V. Studies of the effects of fragment (25–35) of beta-amyloid peptide on the behavior of rats in a radial maze. Neurosci. Behav. Physiol. 2005;35(5):511–518.

27. Tang F., Nag S., Shiu S.Y., Pang S.F. The effects of melatonin and Ginkgo biloba extract on memory loss and choline acetyltransferase activities in the brain of rats infused intracerebroventricularly with beta-amyloid 1-40. Life Sci. 2002;71(22):2625–2631.

28. Hashimoto M., Hossain S., Shimada T., Sugioka K., Yamasaki H., Fujii Y., Ishibashi Y., Oka J., Shido O. Docosahexaenoic acid provides protection from impairment of learning ability in Alzheimer’s disease model rats. J. Neurochem. 2002;81(5):1084–1091.

29. Haque A.M., Hashimoto M., Katakura M., Hara Y., Shido O. Green tea catechins prevent cognitive deficits caused by Abeta1-40 in rats. J. Nutr. Biochem. 2008;19(9):619–626. doi: 10.1016/j.jnutbio.2007.08.008

30. Колобов В.В., Сторожева З.И. Современные фармакологические модели болезни Альцгеймера. Анналы клинической и экспериментальной неврологии. 2014;8(3):38–44.

31. de la Monte S.M., Wands J.R. Review of insulin and insulin-like growth factor expression, signaling, and malfunction in the central nervous system: relevance to Alzheimer’s disease. J. Alzheimers Dis. 2005;7(1):45–61.

32. Salkovic-Petrisic M., Knezovic A., Hoyer S., Riederer P. What have we learned from the streptozotocin-induced animal model of sporadic Alzheimer’s disease, about the therapeutic strategies in Alzheimer’s research. J. Neural. Transm. (Vienna). 2013;120(1):233–252. doi: 10.1007/s00702-012-0877-9

33. Salkovic-Petrisic M;, Osmanovic-Barilar J., Brückner M.K., Hoyer S., Arendt T., Riederer P. Cerebral amyloid angiopathy in streptozotocin rat model of sporadic Alzheimer’s disease: a long-term follow up study. J. Neural. Transm. (Vienna). 2011;118(5):765–772. doi: 10.1007/s00702-011-0651-4

34. Grieb P. Intracerebroventricular streptozotocin injections as a model of Alzheimer’s disease: in search of a relevant mechanism. Mol. Neurobiol. 2016;53(3):1741–1752. doi: 10.1134/S0006297917100029

35. Krügel U., Bigl V., Eschrich K., Bigl M. Deafferentation of the septo-hippocampal pathway in rats as a model of the metabolic events in Alzheimer’s disease. Int. J. Dev. Neurosci. 2001;19(3):263–277.

36. Hu J., Wang X., Liu D., Wang Q., Zhu L.Q. Olfactory deficits induce neurofilament hyperphosphorylation. Neurosci Lett. 2012;506(2):180–183. doi: 10.1016/j.neulet.2011.10.076

37. Avetisyan A.V., Samokhin A.N., Alexandrova I.Y., Zinovkin R.A., Simonyan R.A., Bobkova N.V. Mitochondrial dysfunction in neocortex and hippocampus of olfactory bulbectomized mice, a model of Alzheimer’s disease. Biochemistry (Mosc). 2016;81(6):615–623. doi: 10.1134/S0006297916060080

38. Casas C., Sergeant N., Itier J.M., Blanchard V., Wirths O., van der Kolk N., Vingtdeux V., van de Steeg E., Ret G., Canton T., Dro- becq H., Clark A., Bonici B., Delacourte A., Benavides J., Schmitz C., Tremp G., Bayer T. A., Benoit P., Pradier L. Massive CA1/2 neuronal loss with intraneuronal and N-terminal truncated Abeta42 accumulation in a novel Alzheimer transgenic model. Am. J. Pathol. 2004;165(4):1289–1300.

39. Oakley H., Cole S.L., Logan S., Maus E., Shao P., Craft J., Guillozet-Bongaarts A., Ohno M., Disterhoft J., Van Eldik L., Berry R., Vassar R. Intraneuronal beta-amyloid aggregates, neurodegeneration, and neuron loss in transgenic mice with five familial Alzheimer’s disease mutations: potential factors in amyloid plaque formation. J. Neurosci. 2006;26(40):10129–10140. doi: 10.1523/JNEU- ROSCI.1202-06.2006

40. Ohno M., Cole S.L., Yasvoina M., Zhao J., Citron M., Berry R., Disterhoft J.F., Vassar R. BACE1 gene deletion prevents neuron loss and memory deficits in 5XFAD APP/PS1 transgenic mice. Neurobiol. Dis. 2007;26(1):134–145. doi: 10.1016/j.nbd.2006.12.008

41. Cebers G., Alexander R.C., Haeberlein S.B., Han D., Goldwater R., Ereshefsky L., Olsson T., Ye N., Rosen L., Russell M., Maltby J., Eketjäll S., Kugler A.R. AZD3293: Pharmacokinetic and pharmacodynamic effects in healthy subjects and patients with Alzheimer’s disease. J. Alzheimers Dis. 2017;55(3):1039–1053. doi: 10.3233/JAD- 160701

42. Götz J., Deters N., Doldissen A., Bokhari L., Ke Y., Wiesner A., Schonrock N., Ittner L.M. A decade of tau transgenic animal models and beyond. Brain Pathol. 2007;17(1):91–103. doi: 10.1007/s12035-015- 9132-3

43. Oddo S., Caccamo A., Shepherd J.D., Murphy M.P., Golde T.E., Kayed R., Metherate R., Mattson M.P., Akbari Y., LaFerla F.M. Triple-transgenic model of Alzheimer’s disease with plaques and tangles: intracellular Abeta and synaptic dysfunction. Neuron. 2003;39(3):409–421. doi: 10.1111/j.1582-4934.2008.00276.x

44. Oddo S. The ubiquitin-proteasome system in Alzheimer’s disease. J. Cell Mol. Med. 2008;12(2):363–373.

45. Keller J.N., Hanni K.B., Markesbery W.R. Impaired proteasome function in Alzheimer’s disease. J. Neurochem. 2000;75(1):436–439.

46. Janelsins M.C., Mastrangelo M.A., Oddo S., LaFerla F.M., Federoff H.J., Bowers W.J. Early correlation of microglial activation with enhanced tumor necrosis factor-alpha and monocyte chemoattractant protein-1 expression specifically within the entorhinal cortex of triple transgenic Alzheimer’s disease mice. J. Neuroin- flammation. 2005;2:23. doi: 10.1186/1742-2094-2-23

47. Saido T.C., Iwatsubo T., Mann D.M., Shimada H., Ihara Y., Kawashima S. Dominant and differential deposition of distinct beta-amyloid peptide species, A beta N3(pE), in senile plaques. Neuron. 1995;14(2):457–466.

48. Saito T., Matsuba Y., Mihira N., Takano J., Nilsson P., Itohara S., Iwata N., Saido T.C. Single App knock-in mouse models of Alzheimer’s disease. Nat. Neurosci. 2014;17(5):661–663. doi: 10.1038/nn.3697

49. Masuda A., Kobayashi Y., Kogo N., Saito T., Saido T.C., Itohara S. Cognitive deficits in single App knock-in mouse models. Neurobiol. Learn Mem. 2016;135:73–82. doi: 10.1016/j.nlm.2016.07.001

50. Zhang H., Wu L., Pchitskaya E., Zakharova O., Saito T., Saido T., Bezprozvanny I. Neuronal store-operated calcium entry and mush- room spine Loss in amyloid precursor protein knock-in mouse model of Alzheimer’s disease. J. Neurosci. 2015;35(39):13275–13286. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1034-15.2015

51. Andorfer C., Kress Y., Espinoza M., de Silva R., Tucker K.L., Barde Y.A., Duff K., Davies P. Hyperphosphorylation and aggregation of tau in mice expressing normal human tau isoforms. J. Neurochem. 2003;86(3):582–590.

52. Guo Q., Li H., Cole A.L., Hur J.Y., Li Y., Zheng H. Modeling Alzheimer’s disease in mouse without mutant protein overexpression: cooperative and independent effects of Aβ and tau. PLoS One. 2013;8(11):e80706. doi: 10.1111/j.1750-3639.2007.00051.x

53. Schor N.F. What the halted phase III γ-secretase inhibitor trial may (or may not) be telling us. Ann. Neurol. 2011;69(2):237–239. doi: 10.1002/ana.22365

54. Hu X., Hicks C.W,, He W., Wong P., Macklin W.B., Trapp B.D., Yan R. Bace1 modulates myelination in the central and peripheral nervous system. Nat. Neurosci. 2006;9(12):1520–1525. doi: 10.1038/ nn1797

55. Cheng X.R., Zhou W.X., Zhang Y.X. The behavioral, pathological and therapeutic features of the senescence-accelerated mouse prone 8 strain as an Alzheimer’s disease animal model. Ageing Res. Rev. 2014;13:13–37. doi: 10.1038/emboj.2012.79

56. Manich G., del Valle J., Cabezón I., Camins A., Pallàs M., Pelegrí C., Vilaplana J. Presence of a neo-epitope and absence of amyloid beta and tau protein in degenerative hippocampal granules of aged mice. Age. 2014;36(1):151–165. doi: 10.1007/s11357-013-9560-9

57. Bosch M.N., Pugliese M., Gimeno-Bayón J., Rodríguez M.J., Mahy N. Dogs with cognitive dysfunction syndrome: a natural model of Alzheimer’s disease. Curr. Alzheimer Res. 2012;9(3):298–314.

58. Sparks D.L., Schreurs B.G. Trace amounts of copper in water induce beta-amyloid plaques and learning deficits in a rabbit model of Alzheimer’s disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003;100(19):11065– 11069. doi: 10.1073/pnas.1832769100

59. Van Dam D., De Deyn P.P. Non human primate models for Alzheimer’s disease-related research and drug discovery. Expert Opin. Drug Discov. 2017;12(2):187–200. doi: 10.1080/17460441.2017.1271320

60. Krstic D., Madhusudan A., Doehner J., Vogel P., Notter T., Imhof C., Manalastas A., Hilfiker M., Pfister S., Schwerdel C., Riether C., Meyer U., Knuesel I. Systemic immune challenges trigger and drive Alzheimer-like neuropathology in mice. J. Neuroinflammation. 2012;9:151. doi: 10.1186/1742-2094-9-151

61. Kraska A., Santin M.D., Dorieux O., Joseph-Mathurin N., Bourrin E., Petit F., Jan C., Chaigneau M., Hantraye P., Lestage P., Dhenain M. In vivo cross-sectional characterization of cerebral alterations induced by intracerebroventricular administration of streptozotocin. PLoS One. 2012;7(9):e46196. doi: 10.1371/journal.pone.0046196

62. Chen Y., Liang Z., Blanchard J., Dai C.L., Sun S., Lee M.H., Grund- ke-Iqbal I., Iqbal K., Liu F., Gong C.X. A non-transgenic mouse model (icv-STZ mouse) of Alzheimer’s disease: similarities to and differences from the transgenic model (3xTg-AD mouse). Mol. Neurobiol. 2013;47(2):711–725. doi: 10.1016/j.arr.2013.10.002

63. Kamat P.K., Rai S., Swarnkar S., Shukla R., Nath C. Molecular and cellular mechanism of okadaic acid (OKA)-induced neurotoxicity: a novel tool for Alzheimer’s disease therapeutic application. Mol. Neurobiol. 2014;50(3):852–865. doi: 10.1007/s12035-014-8699-4

64. Kumar A., Seghal N., Naidu P.S., Padi S.S., Goyal R. Colchicines-in- duced neurotoxicity as an animal model of sporadic dementia of Alzheimer’s type. Pharmacol. Rep. 2007;59(3):274–283.

65. Ahlijanian M.K., Barrezueta N.X., Williams R.D., Jakowski A., Kowsz K.P., McCarthy S., Coskran T., Carlo A., Seymour P.A., Burkhardt J.E., Nelson R.B., McNeish J.D. Hyperphosphorylated tau and neurofilament and cytoskeletal disruptions in mice overex- pressing human p25, an activator of cdk5. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000;97(6):2910–2915. doi: 10.1073/pnas.040577797

66. Sundaram J.R., Chan E.S., Poore C.P., Pareek T.K., Cheong W.F., Shui G., Tang N., Low C.M., Wenk M.R., Kesavapany S. Cdk5/ p25-induced cytosolic PLA2-mediated lysophosphatidylcholine production regulates neuroinflammation and triggers neurodegeneration. J. Neurosci. 2012;32(3):1020–1034. doi: 10.1523/JNEU- ROSCI.5177-11.2012

67. Muyllaert D., Terwel D., Kremer A., Sennvik K., Borghgraef P., Devijver H., Dewachter I., Van Leuven F. Neurodegeneration and neuroinflammation in cdk5/p25-inducible mice: a model for hippocampal sclerosis and neocortical degeneration. Am. J. Pathol. 2008;172(2):470–485. doi: 10.2353/ajpath.2008.070693

68. Fischer A., Sananbenesi F., Pang P.T., Lu B., Tsai L.H. Opposing roles of transient and prolonged expression of p25 in synaptic plasticity and hippocampus-dependent memory. Neuron. 2005;48(5):825– 838. doi: 10.1016/j.neuron.2005.10.033

69. De Rosa R., Garcia A.A., Braschi C., Capsoni S., Maffei L., Berardi N., Cattaneo A. Intranasal administration of nerve growth factor (NGF) rescues recognition memory deficits in AD11 anti-NGF transgenic mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005;102(10):3811–3816. doi: 10.1073/pnas.0500195102

70. Houeland G., Romani A., Marchetti C., Amato G., Capsoni S., Cattaneo A., Marie H. Transgenic mice with chronic NGF deprivation and Alzheimer’s disease-like pathology display hippocampal region-specific impairments in shortand long-term plasticities. J. Neurosci. 2010;30(39):13089–13094. doi: 10.1523/JNEUROS- CI.0457-10.2010

71. Capsoni S., Brandi R., Arisi I., D’Onofrio M., Cattaneo A. A dual mech- anism linking NGF/proNGF imbalance and early inflammation to Alzheimer’s disease neurodegeneration in the AD11 anti-NGF mouse model. CNS Neurol. Disord. Drug Targets. 2011;10(5):635–647.


Дополнительные файлы

Для цитирования: Шмакова А.А., Андросова Л.В. Моделирование болезни Альцгеймера на животных. Психиатрия. 2018;1(77):97-108. https://doi.org/2618-6667-2018-77-97-108

For citation: Shmakova A., Androsova L. Modeling Alzheimer’s disease in animals. Psychiatry. 2018;1(77):97-108. (In Russ.) https://doi.org/2618-6667-2018-77-97-108

Просмотров: 24

Обратные ссылки

  • Обратные ссылки не определены.


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 1683-8319 (Print)